大鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的使用和樣本的處理方法介紹

　　大鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞使用方法：

　　1、收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

　　2、細(xì)胞傳代：

　　1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，清洗細(xì)胞一次。

　　2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1m至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中。

　　3)棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸， 然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，放入379C， 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

　　4)待細(xì)胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

　　3、細(xì)胞凍存：

　　1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次。

　　2)添加胰蛋白酶消化液約1m至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中。

　　3)用適量的凍存液懸細(xì)胞，并放置于凍存管中。

　　4)先將大鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞凍存管放置于20°C 1.5h，然后將其移，入-80°C過(guò)夜， 24h后轉(zhuǎn) 入液氨中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80°C。

　　正確的處理樣本是保證ELISA檢測(cè)的正確性和準(zhǔn)確性的一步，下面簡(jiǎn)單介紹一下不同類型的樣本的處理方法：

　　1.血清。血清是常用于ELISA檢測(cè)的一類樣本，處理也比較簡(jiǎn)單，采血過(guò)程中應(yīng)避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放具有過(guò)氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測(cè)的不準(zhǔn)確性。同時(shí)也應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榫w內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測(cè)的假陽(yáng)性。

　　2.血漿。用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融，避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。

　　3.細(xì)胞培養(yǎng)上清，取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管，除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

　　4.細(xì)胞裂解液。

　　5.組織勻漿液。

　　6、尿液、唾液等其他液體生物樣本。